I SEMIC - Seminário de Iniciação Científica da Unifenas

Coelho, Dulcimara Aparecida¹; Semaan, Felipe Silva²; Braga-Vilela, Antonella Sachsida³; Faria-e-Silva, Paulo Márcio de⁴; Fiorini, João Evangelista⁵

A família Trypanosomatidae inclui um grande número de espécies pertencentes a vários gêneros incluindo patógenos e não patógenos. Nos últimos anos, os trabalhos em protozoologia básica têm contribuído para a identificação de tripanosomatídeos causadores de doenças em plantas uma vez que, estes flagelados são capazes de devastar plantações, e por isso são de notória relevância no contexto econômico e social da nação. O presente estudo teve por objetivo isolar tripanosomatídeos em cultura axênica de tomate (Lycopersicum lycopersicum), além de estabelecer condições nutricionais e físico-químicas para o seu melhor crescimento. Quarenta e cinco tomates foram coletados no campus universitário da Unifenas, e cidades próximas de Alfenas-MG. Observou-se a presença de flagelados em três tomates, sendo possível isolar do fruto que apresentou características macroscópicas da doença e portanto um maior número de protozoários. O isolamento dos protozoários foi obtido utilizando-se um meio bifásico (ágar-sangue 10% + Meio Complexo de Roitman), com antibióticos, à 28°C até a obtenção da cultura pura dos flagelados. Em seguida foi realizada a clonagem em placas contendo ágar-sangue de coelho e incubadas à 28°C em jarras apropriadas. Isso possibilitou a obtenção de colônias isoladas de tripanosomatídeos. Os isolados foram criopreservados em nitrogênio líquido. Ensaios físico-químicos, incluindo diferentes faixas de temperatura (5° - 44°C), pH (03 a 09),e osmolaridade, foram feitos para determinar quais as condições que promovem um melhor crescimento. Estudos nutricionais foram realizados utilizando-se a técnica de omissão, para hemina e adenina. Realizou-se estudos morfométricos em câmara clara e morfológicos, a partir de esfregaços corados pelo método Panótico. O crescimento dos protozoários foi de aproximadamente 108 células/ml de cultura, para os Meios Complexo e Definido de Roitman, em condições ótimas de pH (6,5 - 7,0) e temperatura (25° - 28ºC), por 48 horas. No entanto, foi observado que, quando crescidos em Meio Definido de Roitman, mesmo sobre condições ideais, os flagelados apresentaram um pleomorfísmo bastante acentuado, e formas com o flagelo pouco desenvolvido, além de uma diferenciação para a forma opistomastigota/opistomorfo de 19%. Os tripanosomatídeos cresceram bem no Meio de Grace, Gypmi, com ou sem adição de KCl. Estudos morfométricos revelaram medidas semelhantes a outros tripanosomatídeos do gênero Crithidia. Em primeira instância, pode-se sugerir que o isolado não possui endossínbiontes, pela ausência de crescimento no meio isento de hemina e adenina. Até o momento os dados obtidos não foram suficientes para classificar o isolado, mas deve ser de relevância a ocorrência de formas opistomastigotas/opistomorfo uma vez que esta é singular do gênero Herpetomonas e Crithidia..

Palavras-chaves: 1) Lycopersicum lycopersicum 2) Tripanosomatídeos 3) Herpetomonas sp.

¹ Acadêmica do curso de Nutrição - 3° Período - EFOA
² Colaborador - Acadêmico do curso de Farmácia - 7°Período - EFOA
⁴ Colaboradora - Departamento de Ciências Biológicas - EFOA
⁵ Co-orientador - Departamento de Ciências Biológicas - EFOA
⁶ Orientador - Laboratório de Biologia e Fisiologia de Microrganismos - UNIFENAS, Alfenas, MG

Fonte Financiadora: FAPEMIG